草甘膦是一种有机磷内吸传导性除草剂，药液要大量传导到杂草地下根茎组织，才可以做到理想的除草效果。施用草甘膦最重要的一条是选定最佳用药时间。要在杂草生长最旺盛时期、在开花前用药最佳。一般一年生杂草15～20厘米、多年生杂草30厘米左右高度时用药，除草效果最好。不考虑杂草的生育期，待杂草老化后再盲目喷药除草收不到理想的效果。另外，在确定用药浓度时一定要考虑杂草的类形，一般禾本科杂草对草甘膦较敏感，能被低剂量的药液杀死，而防除阔叶杂草时则要提高浓度，对一些根茎繁殖的恶性杂草，则需要较高浓度。杂草叶龄大，耐药性提高，相应的用药量也要提高。如防除果园杂草，一年生禾本科杂草可用10%草甘膦500～700毫升对水30～40公斤，防除一年生阔叶杂草应增加到750～1000毫升，防除多年生恶性杂草用量应增加到1250～1500毫升。但是，用药过量时会迅速杀死植物传导组织，反而不利药液吸收而降低药效。因此，为了经济用药，应先用较低浓度把嫩草杀死，然后10天后再用相应浓度喷恶性杂草。
有的农户想除多种草，为了省工省时，在使用草甘膦时加入其他除草剂，其结果反而不好，因为有些除草剂是不能与草甘膦混和使用的，如克无踪、百草枯等速效型除草剂(以免杂草地上部分过早死亡，丧失草甘膦的内吸传导功能，降低了草甘膦对地下草茎的杀灭效果)，但在草甘膦中加入0.1%的洗衣粉或者加入柴油均能增加药液的渗透性和粘着力，提高药效。
草甘膦是灭生性除草剂，若使用不当，如没有在喷头上套防护罩，草甘膦随风飘散，用没有彻底清洗的喷雾器喷施其他农药等，易引起药害，要格外的注意防范。
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